PCR實驗室建設所需資料

PCR實驗室建設所需資料（liào）

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1周前

4月26日，國家衛健委舉辦全國視頻會議，明確（què）提出“所有縣（xiàn）區級以上疾控機構、二級以上綜合醫院要抓緊進（jìn）行改造，在短時間內形（xíng）成核酸檢測能力”。

各（gè）地的公（gōng）立機構檢測能力不能滿足需求隻是暫時的，獨立醫學實驗室（shì）在（zài）充實檢測力量的同時，發揮自己豐（fēng）富（fù）的檢驗管（guǎn）理（lǐ）運營理念，以及區（qū）域化覆蓋的經驗優勢，融入到“國（guó）家隊”核（hé）酸檢測能（néng）力的建（jiàn）設中，順勢而為，乘勢而（ér）上（shàng）。

隨著各地都（dōu）在建立PCR實驗室（shì），本文（wén）從硬件基礎的角度，梳理了PCR實驗室建設的（de）幾個關鍵點，獨立醫學實驗室可以運用豐富的運營經驗（yàn），進行建設指導、人員梯（tī）隊建立、質控體係搭建、區域化服務支持等。

如何建設PCR實驗室

與PCR實（shí）驗室（shì）建（jiàn）設相關的指導文件主要有四份：

《醫療（liáo）機構管理條例》

《醫療機構臨床實驗室管理辦法》

《臨（lín）床基因擴增檢驗（yàn）實驗室管理暫行辦法》

《醫療機構臨床基因擴增實驗室管理（lǐ）辦法》

要求臨床（chuáng）PCR實（shí）驗室，不但（dàn）在實驗室設置及儀器（qì）設備等硬件上要滿足開展臨床檢驗的條件（jiàn），而且要求實驗室在日常（cháng）工作要有文件（jiàn）化的工作程序。

下麵就（jiù）在PCR實驗室建設過程中的幾個（gè）關（guān）鍵控製點進行闡述:

01

建立PCR實驗室質量管理體係

根（gēn）據實驗室的具體情況編寫質量體（tǐ）係文件，《質量手冊》、《程序文件》、《作業（yè）指導書》，並保證管理體係運行有效。

管理（lǐ）體係的特點是應有明確的目的、規範的管理、有（yǒu）效的（de）製約、高效的機製、能自我（wǒ）發（fā）展（zhǎn）的整體。

建立完善的SOP文件，對完成各項質量活動的方法作出規定（dìng），每個SOP都應對一（yī）個或一組（zǔ）相互關係的活動進行描述。

每個SOP文件應說明該項質量各環節的輸入、轉換和輸出（chū）所需的文件（jiàn）、物（wù）資、人員、記錄以及它們與有關活動的接口關（guān）係。

明確每個環（huán）節轉換過程中各項因素的要求，即由誰做、做什麽、做到什麽程序、達到什麽要求，如何控製（zhì）、形成什麽記錄和（hé）報告，以及相（xiàng）應的審批手續。

規定在質（zhì）量活動中（zhōng）需要注意的例外或特殊情況的糾正（zhèng）措（cuò）施。SOP應簡（jiǎn）練、明確和易懂並且工作人員熟練掌握和嚴（yán）格遵守。

02

PCR實（shí）驗（yàn）室的相關（guān）設置

要（yào）完成一（yī）組PCR實驗，通常需要（yào）經過試劑配製、樣品處理、核（hé）酸擴（kuò）增和產物分析4個實驗過程。

這4個實（shí）驗過（guò）程的實驗用房應相鄰布置，組成一個獨立的（de）PCR實驗區。標準的PCR實驗區包括:試劑準備區、標本製備區、擴增區、產物（wù）分析區、各區配套的緩衝區及公共走廊。

PCR實驗（yàn）室整（zhěng）體平麵布局

某醫院PCR實驗室平麵布局如圖1所示（shì），整個區域有一個公（gōng）用走廊（láng），每（měi）個獨立實驗區設有（yǒu）專門的緩衝（chōng）區。通過壓差控製，使（shǐ）整個PCR實驗過程中試劑和標本免受（shòu）氣溶膠的（de）汙染，並且降低擴增產物對人員和環境（jìng）的汙染。

圖表1、某醫院PCR實驗室平麵圖

試劑準備區

該實驗區主要進行的（de）操作為貯存試劑的製備、試劑的分（fèn）裝和主反應混合液的製備。

試劑和用於標本製作的材料應直接運送至該區，不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存（cún）在本（běn）區內，並在本區（qū）內製備成所需的貯存試劑。

試劑準備區配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計算冷（lěng）負荷時，需要將它們計算在（zài）內。

房間的（de）麵積宜控製在15m2~20m2。本（běn）區的壓力梯（tī）度要（yào）求為:相對正（zhèng）壓狀態，以防（fáng）止外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成汙染。

標本製備區

該（gāi）區（qū）域主要（yào）進行的操作為臨床標本（běn）的保存、核酸(RNA、DNA)提（tí）取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。

標本製備區配備有2~8°C冰箱和（hé）-20°C冰箱，計算（suàn）冷負荷（hé）時，需要將它們計算在內。在標本製備（bèi）區，還需要配備生物安全櫃，用於進行提取核酸的操作。

為避免提取的核（hé）酸在（zài）櫃內反複循環，造（zào）成標本之間（jiān）的交叉汙染，出現假陽性結果，該區域配備的生物安全櫃必須是B2型的。生物安全櫃工作區垂直氣流（liú）全部來自實驗室，排風（fēng）經過高效過濾器(www.gdlingjie.net)過濾後直接排至室外（wài），不允許回到安全櫃和實驗室中（zhōng）。

根據經驗，如果實驗室內配備生物安全櫃，每配備一台，實驗室的麵（miàn）積增加（jiā）10m2;標本（běn）製備區的麵積（jī）宜在25m2~30m2之（zhī）間。本區的壓力梯度要（yào）求為:相對於鄰近區（qū）域為正壓，以避免從鄰近區進入本區的氣（qì）溶膠汙染。

擴增室

該區（qū）域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已製備的（de）DNA模板和合成的cDNA(來自樣本製備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和製備區)製（zhì）備成反應混合（hé）液（yè）等也可在本（běn）區內進行。

在巢式PCR測定中，通常（cháng）在第一輪擴增後必須打開反應管，因此（cǐ）巢式擴增有較（jiào）高的汙染危險性，第二（èr）次加樣必須在（zài）本區內進行（háng）。

擴增室主要（yào）配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀，本文實例（lì）中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

在實（shí）驗室建造過（guò）程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源，以保證其正（zhèng）常工作。該區麵積（jī）控製在15m2~20m2。

本區的壓力梯度（dù）要求為:相對於鄰近區域（yù）為負（fù）壓，以避免氣溶膠（jiāo）從本區漏出（chū）。為避（bì）免氣溶膠所致的汙染，應盡量減少在本區內的不必要（yào）的走動。個別操作如（rú）加樣等應在超淨台內進行。建（jiàn）議采用5~10Pa壓（yā）差，在控製上比較容易實現。

產物分析區

該區（qū）域主要進行的操作為（wéi）擴增片段的測定。如使用（yòng）全自動封閉分析儀器（qì）檢測，此（cǐ）區域可不設。

在室（shì）內配（pèi）備通風櫥，保證房間內的相對負壓，空氣（qì）從室（shì）外流向室內。該區麵積控製在15m²~20m²。

本區是最主要的擴增產物汙（wū）染來源，因此對本區的壓力梯度的要求為:相對於鄰近（jìn）區域為負壓，以避免擴增產物從本區擴（kuò）散至其它區域。建議采用5~10Pa壓差，在控製上比較容（róng）易實現。

03

正負壓（yā）區域（yù）緩衝室的設置

根據（jù）壓（yā）力梯度的要求，試劑配製室和樣品處理室為相對正壓，擴增室和產物分析室為相對負壓，要求正（zhèng）壓的區域和要（yào）求負壓（yā）的區（qū）域的緩衝室內的壓力設計大不相同。

正壓緩衝室符合一般正壓潔淨室的緩衝原則，主要是防止室外環境空氣中（zhōng）的氣（qì）溶膠進入室內。正壓緩衝室的布置如圖2所示。

圖表2、正壓緩衝室的布置圖

負壓緩（huǎn）衝室則是要求緩衝室對核（hé）酸擴（kuò）增室及產物分析區保（bǎo）持正壓，對緩衝室外也保持正壓(主要是滿足室內淨化需要，如室內無潔淨要（yào）求（qiú），此處可以為0壓)。負（fù）壓（yā）緩衝室的布（bù）置如圖3所示（shì）。

圖表3、負壓（yā）緩衝室的布置圖

04